Hücre içi kalsiyum konsantrasyonundaki yükselme ([Ca+2]i), nörotransmitter salınımı, kas kontraksiyonu ve oosit fertilizasyonu da dahil olmak üzere bir dizi hücresel olaylar serisini tetiklemektedir (Clapham, 1995; Berridge MJ, 1993). İntrasellüler kalsiyum seviyesindeki yükselme durumu ve bu yükselmeye karşı oluşan tepki, agoniste ve hücre türüne bağlı olarak farklılık arz etmektedir. Kalsiyuma duyarlı boya fura-2’nin (Grynkiewicz, 1985) hücre membranından girişi, tüm hücre süspansiyonlarında, adherent hücre popülasyonlarında, hücre altı düzeylerindeki [Ca+2]i ölçümünde değişikliklere yol açtığı rapor edilmiştir (Lambert D., 1992).
Nano boyutlarda, hücre altı düzeylerdeki alanlardaki Ca+2 sinyali dalgalarından tüm hücre Ca+2 sinyali dalgalarına kadar değişen geniş bir skalada, mikro saniyeler içerisinde çok sayıda Ca+2 sinyali farklı hücre tipleri tarafından kullanılır (Berridge, 2006; Bootman ve ark., 2001). Bu hücresel Ca+2 sinyallerinin karakteristikleri, dokuya özgü Ca+2 taşıma sistemlerinin ekspresyonuna bağlıdır (Berridge ve ark., 2000). Hücresel Ca+2 sinyalizasyon çeşitliliği, her türlü durumda Ca+2 değişimlerini izlemek için kullanılabilecek tek bir teknik olmadığı anlamına gelir. Bununla birlikte, floresan ratiometrik Ca+2 sinyali ölçüm teknikleri, hücresel Ca+2 sinyali yanıtlarını analiz etmek için çok yönlü olarak yaygın bir biçimde kullanılmaktadır. Tsien ve arkadaşları tarafından (Tsien ve ark., 1982) ilk defa açıklanmasından bu yana, floresan Ca+2 indikatörleri farklı deneysel ortamlarda birçok çeşit hücre modellerinde Ca+2 sinyallerinin araştırılmasında kullanılmaktadır. Uygun florometrik ölçüm cihazları ve uygun indikatörler kullanarak, canlı hücreler üzerinde hücre altı düzeyler de dahil, yüksek hızda, zaman aşımına uğramadan Ca+2 sinyallerini izlemek mümkündür. Bu bölüm hücre içi Ca+2 konsantrasyonunu izlemek için Fura-2AM gibi sentetik floresan indikatörlerinin kullanılması ile Ca+2 sinyallerinin ölçülmesine yönelik pratik yaklaşımları açıklamaktadır.
Kalsiyum Sinyali Kurs Programı |
||
| 1. Ders | Solüsyonların hazırlanması (1xPBS, Kalsiyum buffer, Kalsiyum Free Buffer vb). | Teorik |
| 2. Ders | Kalsiyum Sinyali Analizleri-1 | Pratik |
| 3. Ders | Kalsiyum Sinyali Analizleri-1 | Pratik |
| 4. Ders | Kaspaz 3, Kaspaz 9 ve Apoptozis Analizleri | Pratik |
| 5. Ders | Hücre içi ROS ve Mitokondriyal Depolarizasyon Analizleri | Pratik |
| 6. Ders | Katılımcılara Kalsiyum Sinyali
Analizlerinin Yaptırılması-1 |
Pratik |
| 7. Ders | Katılımcılara Kalsiyum Sinyali
Analizlerinin Yaptırılması-2 |
Pratik |
| 8. Ders | Katılımcılara Apoptozis, Kaspaz-3, -9, Hücre içi ROS ve Mitokondriyal Depolarizasyon Analizlerinin Yaptırılması. | Pratik |
| 9. Ders | Sonuçların Hesaplanması, İstatistiksel Analizi ve Makalede Sunulacak Hazır Hale Getirilmesi-Şekillerin Çizilmesi | Pratik |
| 10. Ders | Tartışma ve Tavsiyeler | Teorik |